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(atb-()sab sin(二)古代诗歌阅咳（本题共2小题，9分）阅读下面这首唐诗，完成15一16题正月崇让宅断依,沙心2分)p53基因是一种重婴的抑癌基因。研究人员按图示流程构建双拷贝p53目的基因月受，再将其与腺病毒穿梭质粒pShuttle连接，构建重组质粒DShuttle一d一p53并对其进行鹦切：将酶切产物与文翻铁陷型腺翔毒我体A正.y一”起，经电穿乳法共转染大高杆,以进行同源重组，然后筛选并提取双拷贝人p53基因重组腺病毒级休从大防P3)用Pc对进行酶切使其线性化，转化直核细胞HEK29g并获得物颗粒。A5一p53)。该病毒颗粒可为各类肿骝的治疗桃供可能的新途径，回答下列同人CDNAPEGFP.C1质粒Pac53Hindcm四KpnpAdEasy-1Pemvp53☒-Pemvp532A双拷贝p53日的基因片段Pac IKpn IPacIPmeKanpShuttle-du-p53(prAd5-du-p53)HindmO质粒复制起始点Kan:卡那霉素抗性基因PacI切Pme IAmp:氨苄青莓索抗性基因盟PacI几化HEK2930路Pme双拷贝人p53基因重组腺病毒颗粒(rAd5-du-p53)(1)图示人cDNA由人体白细胞中mRNA经逆转录获得，该过程需使用酶；该过程所需原料是(2)Pcmv是一种强启动子。对Pcmv进行PCR的过程中，需要在缓冲溶液中添加Mg+,其作用是;该过程中所选择的引物序列不能太短，且两种引物间不能发生构建双拷贝p53目的基因片段时，两个p53基因分别连接Pcmv的优点有(答出一点即可)。(3)实验时，使用T4DNA连接酶相较于E.coli DNA连接酶的优势是复制缺陷型腺病毒载体pAdEasy一1是经过一定处理的，包括去除编码病毒复制蛋白的区段和编码对抗宿主的抗病毒防御蛋白的区段，进行上述加工的理由是(4)PacI酶切使prAd5-du一p53线性化的过程中，片段会被去除。若以肝癌细胞株为材料，以细胞生长抑制率为指标，比较双拷贝人53基因重组腺病毒颗粒对癌细胞的抑制效果，简要写出实验思路：置分领表【高三生物学第6页（共6页）】